Эта небольшая книга, являясь пока единственной в мировой литературе монографией по данному вопросу, в сущности уже стала классической.
Ее автор — известный радиохимик — имеет очень большой опыт работы в радиохроматографии с применением различных способов радиодетектирования. Отли-' чительной особенностью книги является то обстоятельство, что автор обращает внимание читателя на множество экспериментальных тонкостей, от которых в значительной степени зависит успех работы и которые он познал на собственном богатейшем опыте. Это делает книгу особенно ценной в качестве практического пособия для овладения техникой работы в области радиохроматографии.
Б. Никольский
Предисловие
В последнее десятилетие наблюдался постоянный рост использования радиоактивных меток в органической и биологической химии. Этот рост сопровождался непрерывным повышением эффективности и усложнением хроматографических методов. В результате хромато-графические и электрофоретические методы разделения меченых соединений, известные под названием «радио-хроматографические», широко применяются сейчас в мировой научной практике.
В данной книге рассмотрены различные радиохрома-тографические и радиоэлектрофоретические методы. Приведен краткий очерк исторического развития, даны рекомендации по выбору методик для конкретных случаев, детально разобраны практические аспекты методов и приведены примеры их использования, взятые из литературы последних лет.
Я благодарен многим специалистам в данной области за помощь и поддержку при подготовке этой книги, а в особенности Алану Даттону за помощь при написании гл. 6 о высокоэффективной жидкостной радиохроматографии и Нейлу Райту за полезные дискуссии. Я благодарен также замечательному коллективу, возглавляемому г-ном Клодо, в особенности благодарю Рене Грина, Джанет Чёрчьярд, Джанет Чарлтон и Джанин Кинг-Кутс за перепечатку рукописи, Филипа Уайта, Дейва Халла и Пола Эванса за художественное оформление книги и Колина Николсона за некоторые фотографии. Остальные фотографии были предоставлены фирмами, производящими оборудование.
Я благодарен своей супруге Линн за помощь и терпение, а также детям Кристоферу, Мэтью и Мери за не-колько неожиданную заинтересованность в подготовке
Снттинберн, 1977 Т. Роберте
Предисловие редактора перевода ........ &
Предисловие.............. 7
Список сокращений............ 8
Глава 1. Введение . ........... 9
Общее введение............ 9
Применение радиоизотопов в лабораториях .... 11
Литература............. 12
Глава 2. Детекторы радиоактивности, применяемые в хроматографии ............. 13
Введение.............. 13
Ионизационные детекторы......... --13
Пропорциональные счетчики........ 13
Счетчики Гейгера — Мюллера........ 15
Жидкостные сцинтилляционные счетчики..... 19
Сцинтилляционный процесс........ 20
Растворители и сцинтилляторы....... 21
Подготовка проб........... 23
Эффект гашения сцинтилляций....... 25
Жидкостные сцинтилляционные счетчики .... 26
Использование эффекта Черенкова...... 29
Применение твердых сцинтилляторов..... 29
Авторадиография............ 30
Фотографический процесс . ........ 31
Разрешение ............. 32
Искровая камера ........... 33
Полупроводниковые детекторы....... 34
Литература............. 35
Глава 3. Бумажная радиохроматография...... 37
Введение.............. 37
Развитие бумажной радиохроматографии..... 38
Радиосканирование ........ ... 38
Авторадиография........... 44-
Содержание
Измерение активности на фрагментах бумажных хрома-тограмм методом жидкостного сцинтилляционного счета
Применение искровых камер........ 45
Выбор метода измерения радиоактивности в бумажной
радиохроматографии........... 47
Практика бумажной радиохроматографии..... 50
Радиосканирование ........... 50
Устройство приборов и их применение .... 50
Оптимальные условия сканирования ..... 53
Количественные измерения........ 54
Особенности техники бумажной радиохроматографии,
обусловленные сканированием ....... 54
Авторадиография........... 59
Особенности применения авторадиографии ... 59
Детектирование трития......... 61
Измерение активности на фрагментах бумажных хрома-
тограмм методом жидкостного сцинтилляционного счета 61
Методы прямого измерения........ 61
Анализ с предварительным элюированием .... 64
Анализ с сжиганием проб........ 64
Применение искровой камеры....... 67
Применение бумажной радиохроматографии .... 67 Исследование метаболизма лекарственных препаратов и
пестицидов............. 67
Биохимические исследования........ 70
Синтез меченых соединений....... .72
Литература............. 72
''лава 4. Тонкослойная радиохроматография..... 75
Введение.............. 75
Развитие тонкослойной радиохроматографии .... 76
Сканирование ............ 76
Авторадиография........... 84
Применение искровых камер........ 86
Зональный анализ........... 9!
Анализ с сжиганием проб......... 94
Выбор метода измерения радиоактивности в тонкослойной
радиохроматографии........... 95
Изотопы.............. 95
Чувствительность........... 96
Разрешение............. 97
Оборудование ............ 99
Длительность анализа.......... 99
Извлечение меченых соединений из хроматограммы . . 100
Безопасность работ .......... 101
Заключение............. 101
Практика тонкослойной радиохроматографии .... 102
Радиосканирование .......... .102
Разработка и использование приборов .... 102 Особенности техники тонкослойной радиохроматографии, обусловленные сканированием ..... 105
Количественные измерения........ 107
Авторадиография........... 109
Необходимость затемнения комнаты..... 109
Работа с фотоматериалами........ ПО
Время экспозиции.......... 111
Тритий............. ИЗ
Работа с искровой камерой........ ИЗ
Зональный анализ.........^ 11&
Прямое измерение радиоактивности адсорбента методом жидкостного сцинтилляционного счета . . . П5 Жидкостный сцинтилляционный счет с предварительным элюированием веществ с адсорбента . . ." 119
Анализ с сжиганием.......... 120
Применение тонкослойной радиохроматографии . . . 121
Определение радиохимической чистоты..... 121
Биохимические исследования........ 123
Исследования метаболизма пестицидов и лекарственных
препаратов............. '26
Литература............. 129
Глава 5. Радиоэлектрофорез.......... 132
Введение.............. 132
Электрофорез на бумаге........... 132
Выбор метода определения радиоактивности . . . 133
Метод «отпечатков пальцев»........ 134
Применение............. 135
Электрофорез в тонком слое........ 136
Выбор метода определения радиоактивности . . . 137
Применение . ......... 138
. Электрофорез в полиакриламидном геле..... 138
Методы с использованием жидкостного сцинтилляционного счета............. 139
Разрезание слоев геля......... 139
Растворение геля........... 141
Метод непрерывного потока....... 144
Анализ с сжиганием......... 144
Авторадиография........... 145
Регистрация трития .......... 146
Авторадиография соединений с двойной меткой . . 150
Усилитель плотности изображения...... 150
Полупроводниковый детектор........ 151
Выбор метода определения радиоактивности . . . 152
Применение............. 153
Другие электрофоретические методы...... 155
Литература......... .... 156
Глава 6. Колоночная радиохроматография...... 158
Введение.............. 158
Развитие методов непрерывных измерений в колоночной
хроматографии......... . . . . 158
Использование счетчиков Гейгера — Мюллера . . . 158 Использование твердых органических сцинтилляторов 161 Применение сцинтиллирующих стекол и твердых неорганических сцинтилляторов ......... 166
Применение жидких сцинтилляторов . . . . . . . 169
Высокоэффективная жидкостная радиохроматография 170
Изотопы с более высокими энергиями..... 178
Выбор метода измерения радиоактивности в колоночной
радиохроматографии........... 179
Изотопы.............. 180
Чувствительность и эффективность...... 180
Величина разрешения.......... 181
Быстрота проведения анализа....... 181
Оборудование............ 183
Извлечение меченых соединений....... 184
Совместимость образца и растворителя..... 184
Универсальность ........... 185
Практика колоночной радиохроматографии . . . . 186
Высокоэффективная жидкостная радиохроматография 186
Применение колоночной радиохроматографии . . . . 191
Анализ аминокислот.......... 191
Биохимические исследования........ 192
Изучение метаболизма пестицидов и лекарственных препаратов.............. 194
Очистка меченых соединений........ 198
Литература............. 199
Глава 7. Газожидкостная радиохроматография..... 201
Введение.............. 201
Развитие газожидкостной радиохроматографии . . . 202
Методы с непрерывной регистрацией радиоактивности 202
Первые системы с жидким сцинтиллятором . . . 203
Методы с сжиганием......... 205
Детектор с низким фоном........ 212
Новые системы с использованием жидких сцинтилляторов .............. 214
Полупроводниковый детектор....... 217
Метод с использованием промежуточного хранения
разделенных веществ . . . . •..... 217
Методы с измерением активности отдельных фракций 218 Выбор метода измерения радиоактивности для газожидкостной радиохроматографии........ 221
Изотопы.............. 221
Чувствительность.........". . 222
Разрешение............. 222
Быстрота проведения анализа....... 223
Стоимость оборудования......... 223
Выделение меченых соединений после анализа . . . 224
Практика газожидкостной радиохроматографии . . . 224
Приборы промышленного производства..... 224
Условия проведения процесса хроматографического разделения .............. 228
Трубка для сжигания.......... 229
Природа и степень чистоты образцов..... 229
Фоновая скорость счета......... 230
Эффективность............ 231
Применение газожидкостной радиохроматографии . . 231
Определение радиохимической чистоты..... 232
Определение удельной активности ...... 232
Анализ жирных кислот и липидов...... 233
БиЬхимические исследования........ 236
Метаболизм лекарственных веществ и пестицидов . . 237
Анализ остатков пестицидов........ 240
Газожидкостная радиохроматография в сочетании с масс-
спектрометрией............ 240
Литература............. 243
Глава 8. Различные применения радиохроматографии . . . 246
Введение.............. 246
Изучение выщелачивания почвы ....... 246
Колонки с почвой........... 24&
Хроматография в тонких слоях почвы..... 248
Непрерывный контроль радиоактивности в организме животных ............... 249
Литература............. 250
Приложение.............. 251
Жидкостные сцинтилляционные счетчики..... 251
Сканирующие детекторы для бумажных и тонкослойных
хроматограмм............. 252
Искровые счетчики и камеры........ 253
Автоматические приборы для сжигания образцов . . . 253-Проточные системы для регистрации активности в колоночной хроматографии.......... 254-
Газожидкостная радиохроматография ...... 254
