Со времени появления в третьем издании обзора по хроматографии углеводов [1] в этом направлении произошли кардинальные изменения, обусловленные быстрым развитием ВЭЖХ. Множество классических методик, которым ранее придавалось большое значение в химии углеводов, в настоящее время вытеснены методами ВЭЖХ, и эта тенденция устойчиво сохраняется. Необходимо также отметить все более широкое применение аффинной хроматографии при выделении полисахаридов и глико-пептидов, а также открытие в самое последнее время большого числа специфических лектинов. ГЖХ, особенно в сочетании с масс-спектрометрией, представляет собой один из наиболее важных методов структурного изучения углеводов. Продолжение широких исследований в этой области связано прежде всего с модернизацией способов получения летучих производных, повышением эффективности неподвижных фаз и улучшением других параметров, определяющих степень разрешения в такого рода анализах. Существенный прогресс в плоскостной хроматографии связан в последние годы с появлением пластинок для ВЭТСХ, обеспечивающих гораздо большую скорость и эффективность разделения, чем при использовании ТСХ. В настоящей главе в основном обсуждаются новейшие методики разделения и анализа углеводов и их производных и, кроме того, рассмотрены такие не утратившие до настоящего времени своего значения традиционные методы, как ионообменная и гель-хроматография, особенно с точки зрения их сравнения с различными современными автоматическими системами обнаружения, используемыми при хроматографическом анализе углеводов.
7.2. Колоночная хроматография
1ермин «колоночная хроматография» применяется к различного рода системам, в которых механизм разделения связан с адсорбцией, распределением, ионным обменом или молекуляр-°и эксклюзией в зависимости от природы неподвижной фазы.
Содержание
Глава 7. Углеводы. Ш. Чармс . -....... 5
7.1. Введение.........•••!•.. 5
7.2. Колоночная хроматография .,.„.. ^. . . 5
7.2.1. Классические методы. Использование в препаративной хроматографии ............... 6
7.2.2. Высокоэффективная жидкостная хроматография .... ^
7.2.2.1. Тонкоизмельченный силикагель . ...... 8
7.2.2.2. Привитые фазы...........- И
7.2.2.3. Лигандный обмен на катионообменных смолах ... 16
7.2.3. Распределительная хроматография на ионообменных смолах 18
7.2.4. Ионообменная хроматография......... 21
7.2.4.1. Ионный обмен на смолах ,........ 21
7.2.4.2. Хроматография на декстрановых и целлюлозных ионо-обменниках............. 25
7.2.5. Стерическая эксклюзионная хроматография..... 27
7.2.5.1. Анализ молекулярно-массового распределения ... 27
7.2.5.2. Сорбенты для стерической эксклюзионной хроматографии 28
7.2.5.3. Элюенты и условия хроматографирования .... 31
7.2.6. Аффинная хроматография .......... 34
7.2.7. Методы детектирования при колоночной хроматографии . . 36
7.3. Газожидкостная хроматография . ....... 39
7.3.1. Общие экспериментальные условия........ 40
7.3.2. Идентификация и количественное определение компонентов . 43
7.3.3. Производные.............. 44
7.3.3.1. Метилированные метилгликозиды...... ^*
7.3.3.2. Ацетилированные полиолы......... ®
7.3.3.3. Полностью метилированные полиолы...... *^
7.3.3.4. Ацетилированные альдононитрилы....... 2?
7.3.3.5. Триметилсилильные производные....... 2i
7.3.3.6. Трифторацетаты............ eg
7.3.3.7. Другие летучие производные ,....... gg
7.3.4. Использование масс-спектрометрии........ QQ
'. 7.4. Плоскостная хроматография.......... gg
7.4.1. Хроматография на бумаге.......... g4
7.4.2. Тонкослойная хроматография......• g5
: 7.4.2.1. ТСХ на целлюлозе........... 67
7.4.2.2. ТСХ на кизельгуре........... 57
7.4.2.3. ТСХ на силикагеле........• 70
7.4.3. Обнаруживающие реагенты.......• /4
i 7.5. Электрофорез ...,.,•..•••*'
Содержание
7.5.1. Электрофорез на бумаге . . . . . *' . '. • 74
7.5.2. Другие электрофоретические методы ..,.;.. 75 Литература.............•
:Глава 8. Фармацевтические препараты. Л. Фишбейн . I. _ 88
8.1. Введение....... «......
8.2.1. Антиконвульсанты...........•'• 91
8.2.2. Барбитураты.............• 93
8.2.3. Трициклические антидепрессанты........ 96
8.2.4. Бензодиазепины............. 98
8.2.5. Антиаритмические препараты......... 102
8.2.6. Блокаторы р-адренэргических рецепторов...... 103
•; 8.3. Высокоэффективная жидкостная хроматография..... 105
8.3.1. Антиконвульсанты............ 105
8.3.2. Барбитураты.............. 106
8.3.3. Трициклические антидепрессанты........ 106
8.3.4. Бензодиазепины............. 108
8.3-.5. Антиаритмические средства и р-адреноблокаторы .... 113
8.3.6. Противоопухолевые препараты......... 115
8.3.7. Смеси фармацевтических препаратов......, 118
~ 8,4. Газовая хроматография — масс-спектрометрия . . . . . 123
8.4.1. Трициклические антидепрессанты . . . , , , . . 123
8.4.2. Бензодиазепины ..,.....,.,,, 124
8.4.3. Фенацетин и ацетаминофен.......... 124
8,5. Тонкослойная хроматография.......... 125
8.5.1. Лекарственные препараты основного, нейтрального и'кислого характера......... .... 125
8.5.2. Барбитураты.............. 126
:€.5.3. Поиск наркотиков в образцах мочи......... 127
8.5.4. Антиаритмические средства и р-адреноблокаторы . . . . 129
8.5.5. Ион-парная тонкослойная хроматография...... 130
8.5.6. Высокоэффективная тонкослойная хроматография (ВЭТСХ) 130 Литература................ 131
ЧГлава 9. Антибиотики. Дж. Г. Вагман, М. Дж. Вейнстейн 143
9.1. Введение ....,,........... 153
9.2. Хроматографические методы идентификации антибиотиков . . 144
9.3. Специфические методы .,..,,„,..,. 146
9.3.1. Аминогликозиды...........* 145
9.3.2. Макролиды . ,..........'.'.'.' 148
9.3.3. Пенициллины •••....... ' 149
9.3.4. Цефалоспорины t .......'. \ ... 150
9.3.5. Тетрациклины.........: ' ' ' 151
9.3.6. Полипептиды , . . ,......... ^^
9.3.7. Полиены............... ^^
9.3.8. Другие антибиотики.....\ '..... 153
Литература......>........, 154
Глава 10. Нуклеиновые кислоты. Г. Дж. Каулинг ...162
10.1. Введение ........ jgo
10.2. Азотистые основания, нуклеотиды и нуклеозид'ы .' .' .' .' ' 162 10.2.1. Состав нуклеиновых кислот...... , '. 162
i 10,2.2. Хроматография на колонках ,,,'.'.. '. '. ' 163
Содержание .n_
10.2.3. Тонкослойная хроматография . . . . .
• 10.2.4. Электрофорез...........' ' |°5
; 10.2.5. Гель-хроматография........._' '°7
, 10.3. Олигонуклеотиды . ....._' jjj?
10.3.1. Ионообменная хроматография.....'. ' ' f«o
\ 10.4. Транспортные РНК........... ' !~°
' 10.5. Высокомолекулярные РНК........ |~g
' 10.5.1. Аффинная хроматография....... ;~?
10.5.2. Гель-электрофорез.......... \7j
•' 10.6. Дезоксирибонуклеиновые кислоты ....... joo
10.6.1. Хроматография на гидроксиапатите....._' (go
10.6.2. Гель-электрофорез ....,...„ too
10.6.3. Хроматография на сорбенте RPC5 ' \ ' jg^ :'' 10.7. Определение нуклеотидной последовательности .... 188
10.8. Нуклеопротеиды .......... ! 191
10.8.1. Структура хроматина.......... 193
Литература...........«..'.'. 197
Глава 11. Порфирины и родственные им производные тет-
рапиррола. Дэвид Дольфин...... 201
11.1. Структура и химические свойства тетрапирролов . , „„,
11.1.1. Стабильность ... on
11.1.2. Обнаружение .........'•'•''•'• ми.
"11.2. Водорастворимые соединения........ . . 9пк
11.2.1. Порфиринкарбоновые кислоты...... . ™«
1 11.2.1.1. Бумажная хроматография........ 90S
11.2.1.2. Тонкослойная хроматография...... " OQO
" •! 11.2.1.3. Колоночная хроматография....... 209
11.2.2. Металлопорфиринкарбоновые кислоты ...... 212
11.2.2.1. Бумажная хроматография........ 212
11.2.2.2. Тонкослойная хроматография....... 213
11.2.2.3. Колоночная хроматография......., 214
11.2.3. Водорастворимые порфирины, лишенные карбоксильных групп............... 215
11.3. Водонерастворимые соединения ....'.."..' .' 216
11.3.1. Порфирины ............. 216
11.3.1.1. Эфиры порфиринкарбоновых кислот ..... 216
поп V2' Октаалкил- ч -«езо-тетраарилпорфирины .... 225
11.3.2. Металлопорфирины........... 227
11.3.2.1. Эфиры металлопорфиринкарбоновых кислот . . . 227
11.3.2.2. Металлооктаалкил- и металло-жезо-тетраарилпорфи-рины......., ..... 229
11.3.3. Хлорофиллы и родственные им фотосинтезирующие пигменты............... 230
11.3.3.1. Тонкослойная хроматография ....... 231
11.3.3.2. Колоночная хроматография........ 232
11.3.4. Желчные пигменты , !....... 236
Литература......г <....... 237
Глава 12. Фенольные соединения. Д. Б. Харборн . . • 242
12.1. Введение ...............242
12.2. Бумажная хроматография '.'.'.'.'.',',..•'• 242
12.2.1. Системы растворителей.......... 243
12.2.2. Цветные реакции , . . . . • 2;§
12.2.3. Флавоноиды ..'..'......... 245
' 12.2.4. Антоцианы................ 248>
12.2.5. Флавонолы и флавоны ....••••••
12.2.5.1. Метиловые эфиры флавонолов ....«••••
12.2.5.2. Флавонолгликозиды.............
12.2.5.3. С-Гликозилфлавоны..........
12.3. Электрофорез на бумаге..........'
12.4. Тонкослойная хроматография.......... ~j*2
12.4.1. Введение.............- • ??'
12.4.2. Сорбенты и растворители.......... ^оо
12.4.3. Простые фенольные соединения ,,.,,,-• ^°' •'••*• 12.4.4. Флавоноиды............. 2W1
12.4.5. Оксихиноны............. ~^f
1 12.5. Крупномасштабная колоночная хроматография..... 2ЬЗ'
12.5.1. Сравнительная характеристика методов...... 2Ь*
12.5.2. Полиамид.............. 264
;: 12.5.3. Сефадекс.............. 265-
":• 12.6. Газо-жидкостная хроматография . . ,|.....• 2ЬЬ,
1 12.7. Высокоэффективная жидкостная хроматография..... 268
12.8. Заключение............... 272'
Литература............. • • 2/3:
Глава 13. Пестициды. Л. Фишбейн ... . . . г • ,- 277
:, 13.1. Введение........ . ...... 27Г
f 13.2. Газовая хроматография........... 277
13.2.1. Карбаматы.............. 277
13.2.2. еилш-Триазины............ 280
13.2.3. Хлорорганические пестициды......... 282
13.2.4. Фосфорорганические пестициды...... . . 285
13.3. Высокоэффективная жидкостная хроматография . . . . . 288-
13.3.1. Карбаматы ............. 289>
13.3.2. силж-Триазины ............ 291
" 13.3.3. Хлорорганические пестициды......... 292'
'•'••• 13.3.4. Фосфорорганические пестициды........ 294
13.3.5. Производные мочевины ,......... 294-
* 13.4. Хроматомасс-спектрометрия.......... 295
13.4.1. Хлорорганические пестициды......... 295.
13.4.2. Хлорированные дибензо-и-диоксины . ..... 297'
'•• 13.5, Тонкослойная хроматография.......... ЗОО1
". 13.6. Нитрозированные пестициды и загрязнение окружающей среды
микроколичествами нитрозаминов ..,,.».. 300
Литература................ 301
Глава 14. Неорганические соединения. М. Ледерер . . 308
14.1. Введение............... 308
14.2. Равновесие комплексообразования........ 309-
14.3. Медленно устанавливающиеся равновесия комплексообразования 316
14.4. Гидрофобная адсорбция и «эффект перхлората»..... 318
14.5. Образование ионных пар или комплексов, имеющих внешнюю
координационную сферу.........., 320
14.6. Ионная хроматография..... ...... 321
14.7. Высокоэффективная жидкостная хроматография (ВЭЖХ) . , 324
14.8. Гель-хроматография............ 327
14.9. Газовая хроматография........... 329'
14.10. Разделение оптических изомеров......... 330»
14.11. Разделение координационных комплексов...... ^'
14.12. Скандий, иттрий, редкоземельные металлы и актиний ... 334
14.13. Конденсированные фосфаты ........•• 335
14.14. Силикаты................ 339
Литература.................341
Глава 15. Неуглеводородные газы. Ярослав Янак . . .344
15.1. Введение............... 344
15.2, Разделение газов и его применение...... . . 346
15,2.1. Общие соображения ........ . : 346
, -: 15.2.2. Постоянные газы............ 349
15.2.3. Промышленные газы........... 351
15.2.4. Газы биологического происхождения...... 352
- 15.2.5. Инертные газы............ 352
15.2.6. Газообразные соединения азота........ 352
15.2.7. Газообразные соединения серы........ 353
15.2.8. Соединения галогенов......... . . 354
15.2.9. Газообразные гидриды и прочие газы ...... 356
15.3, Разделение изотопов и спиновых изомеров ,..,,. 358
15.4. Анализ микроколичеств ,......... 359
15.4.1. Концентрирование микрокомпонентов, содержащихся в газах .......... ..... 361
15.4.2. Количественный микроанализ при неизвестном составе матрицы пробы............. 363
15.4.3. Увеличение чувствительности детекторов..... 365
.Литература................ 366
Глава 16. Углеводороды. Э. Р. Адлард . . . . . .373
' 16.1. Введение...............373
"•-' 16.2. Газовая хроматография........... 373
16.3. Аппаратура............... 375
16.4. Анализ газов............., 378
16.5. Смеси летучих жидких углеводородов ....... 384
16.6. Смеси углеводородов керосиновых и газойлевых фракций . , 392
16.7. Многоядерные ароматические углеводороды ...... 394
16.8. Смазочные масла и сырая нефть......... 396
16.9. Жидкостная хроматография.......... 398
16.10. Тонкослойная хроматография......., , 404
16.11 Заключение -,..,,,....... 406
Литература...............'. \ 408
