СеГОДНЯ ГИСТОХИМИЯ занимас! дичилвиь ivi^iu о ivikivwiikvuuivi ау-
юле биологов и медиков. Об этом свидетельствует систематическое еличение числа соответствующих публикаций, издание специальных стохимических журналов и" монографий, регулярное проведение межнародных конгрессов, а также организация в целом ряде стран на-ных гистохимических обществ. Автор данной книги профессор Лейп-гского университета X. Луппа является председателем такого щества в ГДР. В выборе и изложении материала отразился большой цагогический опыт автора.
Перевод на русский язык книги X. Луппы окажется несомненно по-зным для дальнейшего развития гистохимии в нашей стране.
В этой книге в отличие от опубликованных ранее на русском языке ководств по гистохимии в каждой главе описанию гистохимических тодик предпослано краткое изложение теоретических предпосылок, сположение материала соответствует последовательности операций стохимического анализа: предварительная обработка материала (фикция, заливка, приготовление срезов), гистохимическое распознавание зличных соединений по классам, дифференциальное выявление от-льных соединений внутри классов. Самостоятельные разделы посвя-:ны гистохимии нуклеиновых кислот, белков, липидов, полисахаридов, гментов, биогенных аминов и неорганических веществ. Особое место иимает гистохимия ферментов. Отдельные главы посвящены описа-ю принципов радиоавтографии, иммуногистохимии и цитофотоме-ии.
При малом объеме, выгодно отличающем книгу от таких руко-дств, как «Гистохимия» Э. Пирса и «Электронная гистохимия»
аиера, она охватывает все важнейшие разделы и отражает современ-е состояние данной науки. Написанная доступным языком, книга Луппы может служить хорошим современным учебным и практиче-им пособием. Нет сомнений в том, что книга эта не залежится на пол-х, она станет настольной книгой не только для гистохимиков, но и для -х, кому приходится сталкиваться с подобными методами,—для мор-шогов, биохимиков и физиологов разных направлений.
Н. Райхлин
ОГЛАВЛЕНИЕ
Й„™иИее.РеДаКТОра-Р»°-
....... 5
.............................. 6
1. Введение.................................. 7
1.1. Предмет и задачи гистохимии............... 7
1.2. Этапы развития гистохимии.......... 9
2. Методы гистохимии.......................... ц
2.1. Методы консервирования ткани ............. 12
2.1.1. Замораживание—высушивание (лиофильная сушка) 12
2.1.2. Замещение в замороженном состоянии ....... 21
2.1.3. Получение замороженных срезов ........... 25
2.1.4. Использование криостата ................ 26
2.1.5. Резак для ткани, вибратом............... 29
2.1.6. Криоультрамикротомия.................. 30
2.1.7. Химическая фиксация................... 31
2.2. Гистохимическое выявление................ 53
2.2.1. Типы реакций........................ 53
2.2.2. Примерный план гистохимической процедуры ... 54 3. Гистохимическая диагностика веществ.............. 57
3.1. Гистохимический анализ отдельных классов веществ 59
3.1.1. Белки ............................. 59
3.1.2. Нуклеиновые кислоты................... 59
3.1.3. Углеводы........................... 61
3.1.4. Липиды............................ 62
4. Гистохимия отдельных классов веществ и ферментов .... 65
4.1. Белки............................... 65
4.1.1. Характеристика белков на основе их физико-химических и биологических свойств .............
4.1.2. Специфические гистохимические методы выявления белков............................. 67
4.1.3. Блокирование и превращение реакционноспособных групп в белках........................ 82
4.1.4. Электронно-микроскопическое выявление белков 83
4.1.5. Методы выявления белков................ 84
4.2. Нуклеиновые кислоты..................... 92
4.2.1. Выявление пуриновых и пиримидиновых оснований
по УФ-поглощению............ 93
4.2.2. Реакции выявления углеводного компонента .... 95
4.2.3. Реакции выявления фосфорной кислоты....... 97
4.2.4. Выявление нуклеиновых кислот с помощью специфических ферментов и химической экстракции..... 101
4.2.5. Электронно-микроскопическое выявление нуклеиновых кислот......................... 101
4.2.6. Методы выявления нуклеиновых кислот....... 101
4.3. Углеводы.............................. 108
4.3.1. Классификация углеводов................. 108
4.3.2. Гистохимические методы выявления углеводов . . 111
4.3.3. Электронно-микроскопическое выявление углеводов 129
4.3.4. Методы выявления углеводов.............. 131
4.4. Липиды............................... 141
4.4.1. Классификация липидов.................. 142
4.4.2. Свойства отдельных групп липидов.......... 142
'4.4.3. Гистохимическое выявление липидов......... 146
4.5. Ферменты............................. 171
4.5.1. Разделение ферментов................... 172
4.5.2. Общие основы гистохимии ферментов........ 172
4.5.3. Гидролазы.......................... 177
4.5.4. Трансферазы......................... 204
4.5.5. Карбоангидраза (КФ 4.2.1.1)............... 207
4.5.6. Оксидоредуктазы...................... 208
4.5.7. Выявление ферментов с использованием субстратной пленки и полупроницаемых мембран......... 219
4.5.8. Методы гистохимического выявления ферментов . 221
4.6. Пигменты............................. 244
4.6.1. Меланин............................ 245
4.6.2. Гемосидерин......................... 246
4.6.3. Липидные пигменты.................... 248
4.6.4. Методы выявления пигментов............. 250
4.7. Биогенные амины........................ 252
4.7.1. Свойства, классификация и распространение .... 253
4.7.2. Гистохимическое выявление биогенных аминов . . 255
4.7.3. Методы гистохимического выявления биогенных аминов............................. 260
4.8. Неорганические вещества................... 266
4.8.1. Методы гистохимического выявления неорганических веществ......................... 267
Радиоавтография
.1. Физические .__........................ 278
2. Фоточувствительный материал, экспозиция....... 280
5.2.1. Фоточувствительный материал............. 280
5.2.2. Экспозиция.......................... 281
......................... 278
5.1. Физические основы
5.2. '
5.3. Получение радиоавтографов................. 283
5.4. Радиоавтография биологических объектов........ 283
5.4.1. Радиоавтография целого животного.......... 284
5.4.2. Микрорадиоавтография.................. 284
5.4.3. Метод съемной пленки и метод погружения .... 289
5.5. Применение радиоавтографии................ 296
6. Иммуногистохимия........................... 297
6.1. Методы выявления комплекса антиген—антитело с помощью флуоресцентного микроскопа........... 299
6.1.1. Прямая локализация антигена............. 299
6.1.2. Прямая локализация антител.............. 299
6.1.3. «Сэндвич»-метод...................... 299
6.1.4. Методы иммунофлуоресценции с использованием комплемента........................ 300
6.2. Электронно-микроскопическая иммуногистохимия ... 301
6.2.1. Маркирование тяжелыми металлами и ферритином 301
6.2.2. Маркирование ферментом................ 302
6.3. Применение иммуногистохимии............... 304
7. Количественная гистохимия..................... 307
7.1. Цитофотометрия......................... 307
7.1.1. Микрофотометры...................... 307
7.1.2. Гистохимические предпосылки............. 309
7.2. Количественная гистохимия нуклеиновых кислот. ... 311
7.2.1. Количественное исследование нуклеиновых кислот с помощью ультрафиолетовой микроспектрофотоме-трии.............................. 311
7.2.2. Количественное определение ДНК и РНК при окрашивании основными красителями........... 312
7.2.3. Количественное определение ДНК по реакции Фе'ль-
гена............................... 314
7.3. Количественная гистохимия белков............. 315
7.3.1. Определение белков по поглощению в ультрафиолетовом свете.......................... 315
7.3.2. Определение белков с помощью автофлуоресценции 316
7.3.3. Определение белков с помощью интерферометрии 316
7.3.4. Определение белков с помощью реакций окрашивания ............................... 317
8. Буферные смеси............................. 319
0,2 М ацетат-уксуснокислый буфер, рН 3,5 — 5,6 ..... 319
Маточный раствор ........................ 319
0,05 М какодилатный буфер, рН 5,0—7,4........... 319
Маточный раствор ........................ 319
Веронал-ацетатный буфер, рН 2,62—9,16............ 320
Маточный раствор ........................ 320
0,05 М mpuc-малеатный буфер, рН 5,2—8,6.......... 321
Маточный раствор ........................ 321
0,05 М Na-малеатный буфер, рН 5,2—6,8........... 321
Маточный раствор ........................ 321
0,05 М трмс-HCl буфер, рН 7,19—9,10............. 322
Маточный раствор........................ 322
0,1 М фосфатный буфер, рН 5,7—8,0.............. 322
Маточный раствор ........................ 322
Список литературы............................ 323
Предметный указатель.......................... 332
